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微生物檢測知識|無菌室潔凈度檢測方法與步驟
微生物實驗室內,最顯眼的就是用板材和玻璃建造的無菌室。無菌室外要設一個緩沖間,錯開門向,以免氣流帶進雜菌。無菌室和緩沖間都必須密閉、室內裝備的換氣設備必須有空氣過濾裝置。在獲得了無菌環境和無菌材料后,只有保持無菌狀態,才能對某種特定的已知微生物進行研究。無菌室在消毒處理后,無菌試驗前及操作過程中需檢查空氣中菌落數,以此來判斷無菌室是否達到規定的潔凈度,常有沉降菌和浮游菌測定方法。
根據空氣潔凈度的不同,無菌室可分為哪幾個級別。
一般情況下,無菌室的5261等級有百級,千級,萬級,十萬級,百萬級等等。
凈化等級一般分為100級、1000級、10000級、100000級,現在2010年版的GMP 凈化車間已經不用這個叫法了,分為ABCD級別,分別相對應于98版的幾個級別,通過檢測區域內的塵埃粒子數、浮游菌數、沉降均數評價凈化級別,各個級別 有不同的要求,凈化等級分靜態、動態兩種。
潔凈室是指將一定空間范圍內之空氣中的微粒子、有害空氣、細菌等之污染物排除,并將室內之溫度、潔凈度、室內壓力、氣流速度與氣流分布、噪音振動及照明、靜電控制在某一需求范圍內,而所給予特別設計之房間。亦即是不論外在之空氣條件如何變化,其室內均能俱有維持原先所設定要求之潔凈度、溫濕度及壓力等性能之特性。無塵車間可以分為以下幾個級別:
1級 這個級別的無塵車間主要用于制造集成電路的微電子工 業,對集成電路的精確要求為亞微米。
10級 這個級別的無塵車間主要用于帶寬小于2微米的半導體工業。
100級 很多人認為,這一級無塵車間是最常用因而是最重要的無塵車間,人們常常錯誤地將100級潔凈室稱為無菌室,以說明“無菌”的或“無塵”的環境要求,100級無塵室可用于醫藥工業的無菌制造工藝等,這一潔凈室大量應用于,植如體內物品的制造,外科手術,包括移植手術,集成器的制造,那些對細菌感染特別敏感的病人的隔離治療,比如像骨髓移植病人術后的隔離治療。
1000級 這個級別的無塵車間主要用于高質量光學產品的生產,還用于測試,裝配飛機蛇螺儀,裝配高質微型軸承等。
10000級 萬級無塵車間用于液壓設備或氣壓設備的裝配,某些情況下也用于食品飲料工業,此外,萬級無塵車間在醫工業中也很常用。
100000級 十萬級無塵車間用于很多的工業部門,比如光學產品的制造,用于較小的元器件制造大型的電子系統,液壓或氣壓系統的制造,食品飲料的生產,醫、藥工業也常常使用這一級無塵車間。
沉降菌檢測方法及標準
以無菌方式將3個營養瓊脂平板帶入無菌操作室,在操作區臺面左、中、右各放1個;
打開平板蓋,在空氣中暴露30min后將平板蓋好,置36℃士1℃培養48h,取出檢查,3個平板上生長的菌落數平均小于1個。
浮游菌檢測方法及標準
用專門的采樣器,宜采用撞擊法機制的采樣器,一般采用狹縫式或離心式采樣器,并配有流量計和定時器,嚴格按儀器說明書的要求操作并定時校檢,采樣器和培養皿進入被測房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌,使用的培養基為營養瓊脂培養基或藥典認可的其他培養基。
使用時,先開動真空泵抽氣,時間不少于5min,調節流量、轉盤、轉速。
關閉真空泵,放入培養皿,蓋上采樣器蓋子后調節縫隙高度。
置采樣口采樣點后,依次開啟采樣器、真空泵,轉動定時器,根據采樣量設定采樣時間。
全部采樣結束后,將培養皿置36℃士1℃培養48h,取出檢查,浮游菌落數平均不得超過5個/m3。每批培養基應選定3只培養皿做對照培養。
無菌操作臺面或超凈工作臺還應定期檢測其懸浮粒子,應達到100級(一般用塵埃粒子計數儀)檢測,并根據無菌狀況必要時置換過濾器。
定期進行潔凈度再驗證
定期(每季度、半年、1年)或當無菌室設施發生重大改變時,要按國家標準GB/T16292-2010《醫藥工業潔凈室(區)懸浮粒子的測試方法》進行潔凈度再驗證,以確保潔凈度符合規定,保存驗證原始記錄,定期歸檔保存,并將驗證結果記錄在無菌室使用登記冊上,作為實驗環境原始依據及趨勢分析資料。
并定期對無菌室的環境檢測數據進行趨勢分析和評估,根據評估結果,了解無菌室設施環境質量的穩定狀況及變化趨勢,決定是否有必要修訂相應的警戒和糾偏限度。
定期更換新的紫外燈管、更換凈化系統的初效、中效、高效頭
定期(至少每年1次)更換新的紫外燈管,以確保紫外燈管滅菌持續有效。
并同時在使用登記本上做好更換記錄,定期歸檔保存。
至少2年1次,或按無菌室驗證實際情況,定期更換初效、中效、高效頭。
以確保凈化系統的功能持續有效,并同時在使用登記本上做好更換記錄,定期歸檔保存。
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