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畜禽血液樣品的采集、制備與保存方法
血液不斷地在全身流動,參與機體的各種功能活動,對動物的新陳代謝以及維持內環境和保持與外界環境間的平衡起著重要的作用。當血液發生病理變化時,常常會影響全身的組織和器官,而組織和器官的病變又可以引起血液成分的變化,因此,血液的檢驗在疾病的診斷中起到十分重要的作用;臨床檢驗采用的血液樣品分為全血、血清和血漿。全血主要用于血細胞成分的檢驗,血清和血漿主要用于大部分臨床化學檢查和免疫學檢驗。血液樣品的采集、制備與保存是重要的前期工作,是保證正確診斷的基本條件。
1.采集部位與方法
畜禽血液樣品的采集部位和方法,與種類、檢測項目、試驗方法及用血量有關,視實際情況而定。
1.1雞的采血技術
1.1.1翅靜脈采血:是常用的采血部位,翅靜脈在肘關節腹側的表面,清晰地暴露于皮膚之下,肉眼可見。采血時先拔去該部位的羽毛,抽血時,動作輕柔緩慢,防止血管塌陷不回流,采血后略移動皮膚輕壓即可止血;由于雞的皮膚游離性大,采血后容易形成血腫。
1.1.2心臟采血:此方法多用于進行尸體剖檢前的血液采集檢驗。將雞仰臥保定,針頭從V型鎖骨前端刺入,或者在靠近心臟的胸側壁刺入;心臟采血過程中,如果操作不慎,易損傷肺臟,更有慎者,引起大出血死亡。
1.1.3頸靜脈采血:雞的左側頸靜脈很細,通常右側頸靜脈采血。在皮膚上的一個無毛的溝正好是右側頸靜脈所處的位置。頸靜脈游離性大,皮膚松弛,采血后易于形成血腫。
1.2豬采血技術
1.2.1前腔靜脈采血:豬前腔靜脈是由左右兩側的頸靜脈與腋靜脈至第一對肋骨間的胸骨柄匯合形成。采血時,針頭刺入部位在與耳根和對側肩胛骨上緣連線垂直線的胸骨端處,大豬采用站立保定,小豬可以采用仰臥保定法。左側靠近膈神經,故以右側采血為宜。
1.2.2耳靜脈采血:一般用于體格較大的豬。保定后,耳部消毒滅菌,以手指壓迫近心端耳部靜脈,使血管努張,針頭刺入血管后,動作要輕柔,采血要緩慢,否則血液不回流使靜脈癟陷。
1.3牛的采血技術
1.3.1頸靜脈采血:將頭向一側保定,用手指壓迫頸靜脈溝處,待血管怒張后,于采血部位消毒進針采血。
1.3.2尾靜脈采血:采血人員站立牛正后方,將牛尾向上抬起180度,在第一尾錐與第二尾錐之間的尾中線上進針采血。此方法需要人員少,采血速度快,可以獨立操作。
1.4馬、羊的采血技術
馬、羊均采用頸靜脈采血。方法同牛的頸靜脈采血。
1.5犬、貓的采血技術
一般在后肢外側小隱靜脈或前肢內側皮下靜脈采血,采血前由助手保定,在采血部位的近心端扎止血帶,待血管怒張后,迅速刺入采血器,松開止血帶左手固定針頭,采血力度要適當。
2.血液樣品的處理
2.1血漿的制備:在采血器內加入適量的抗凝劑,采血后,反復顛倒采血器,使抗凝劑與血液充分混勻,靜置或經過離心使血細胞下沉后,上清液即為血漿。
2.2血清的制備:首先將采集的血液樣品置室溫半小時,待血液凝固后2000-3000轉/分離心5-10分鐘,上清夜即為血清;如離心后有輕微的溶血,用牙簽將血凝塊挑出,將混有紅細胞碎片的血清再次離心,用干凈吸管收集血清于干燥的指型管中,貼上標簽備用。如血清溶血嚴重,應剔出樣品。
2.3全血的制備:全血制備與血漿制備基本相同。供全血分析時,抗凝劑選用會直接影響化驗結果,選用抗凝劑的原則:主要用于血液PH值和血液電解質測定的應選用肝素;檸主要用于血液促凝時間的測定應選用檸檬酸鈉;主要用于血液有形成分檢查的全血應選用EDTA;草酸鹽不能用作血小板計數和尿素、血氨、非蛋白氮等含氮物質的檢測;
3.血液樣品的保存與運送
采集的血液樣品如不能及時進行檢驗,必須做適當的處理,防止其成分發生大的變化。
通常分離到的血清與血漿樣品保存于密閉試管中,存放于4℃冰箱內或冷凍。
全血樣品應保存于4℃冰箱內,檢驗時,樣品必須達到室溫,達到室溫之后顛倒數次,使血液充分混勻后,方可檢驗。
如果樣品能在24小時內送往實驗室,可保存于4℃環境的保溫箱內,如果24小時內不能抵達或有些樣品送往外地實驗室時,樣品必須冷凍處理后,并在低溫下運送。運送途中防止樣品泄漏,密閉封裝并加冰袋運送。同時要填寫詳細的樣品記錄。
4.分析:血液樣品變異因素的控制
嚴格控制血液樣品的 變異因素,是使檢測結果盡可能符合客觀情況的重要環節。因此,在采血過程中應注意下列問題:
4.1.規定動物的采血時間:有些血液化學成分有明顯的晝夜波動,對采血動物,應在禁食12小時后采血,這樣可以將食物對血液各種成分的濃度的影響減少到最低程度。在剛進完食動物身上采取的血液樣品,往往出現血糖、甘油三酯增高,無機磷降低,麝香草酚濁度增加。進食富含脂肪的飼料,常導致血清混濁而干擾很多項目的生化檢測。
4.2.血液樣品來源一致:動脈血和經脈學的化學成分略有差異,整個試驗期間,采取的血液樣品必須一致。
4.3.防止分解:血液內某些化學成分,離體后由于氧化酶或細菌的作用,容易分解,致其含量有所改變。所以,為了防止血液內某些化學成分的分解,血液樣品被采集后應立即按規定處理,及時檢測或加入適當的保存劑按規定保存。
4.4.防止氣體逸散:血液暴露于空氣中后,二氧化碳迅速逸出,并吸收氧氣提高血氧飽和度,進而引起血漿成分的改變,因此,在采血過程中要根據檢測項目的需要來采取適當的采血方式。
4.5.防止污染:采血器及樣品容器都必須用化學處理并用重蒸餾水沖洗,防止銅、鐵等金屬離子和污染物對影響檢測結果。并且在做作蛋白結合碘測定時,禁用碘酊消毒采血部。
4.6.防止溶血:溶血可以影響許多生化檢測項目的結果。紅細胞破裂后釋放出的物質與血漿中許多成分的濃度不一樣,如鈉、氯化物、鈣等在血漿中的濃度要高于紅細胞內的濃度,應予以防止。
4.7引起溶血原因是強力震蕩、離心速度過快、溫度過低或者過高、加入與血液環境不等滲液體、放置時間過長等等引起紅細胞破裂的因素。
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